Colecciones del Servicio de Cultivos Biológicos - IBVF

i 1. CIANOBACTERIAS

Las cianobacterias son microorganismos que, en una organización procariótica, son capaces de realizar una fotosíntesis oxigénica similar a la de plantas superiores. Se agrupan en cinco Secciones, cuyas características básicas se exponen a continuación. En el Servicio de Cultivos Biológicos del Centro de Investigaciones Científicas Isla de la Cartuja se dispone de una colección de cianobacterias con representantes para cada una de las Secciones.

Condiciones de cultivo

Los medios más utilizados para el cultivo de las cianobacterias de la colección son el medio BG11₀ y el medio ASN-III (RippKa et al, 1979). Para medio sólido se utiliza Bacto-Agar (1% p/v).

Las distintas estirpes se cultivan en condiciones de fotoautotrofía en cámara termostatizada a 30°C.

Secciones

Unicelular; células simples o formando agregados rodeados de capas de pared celular externa adicionales	Reproducción por división binaria o por gemación		Sección I
	Reproducción por fisión múltiple dando lugar a pequeñas células hijas (baeocitos) o por fisión múltiple y fisión binaria.		Sección II
Filamentosas; un tricoma (cadena de células) que crece por división de células intercalares	Reproducción por formación de hormogonios, por rotura al azar del tricoma, y (s. IV y V) algunas veces por germinación de acinetos.	Tricoma compuesto siempre de células vegetativas	División en un plano Sección III
		En la ausencia de nitrógeno combinado los tricomas tienen heterocistos, algunos también acinetos	División en un plano Sección IV
			División en más de un plano Sección V

Listado de estirpes (Fotos de la colección-pdf)

NOMBRE	Sección	Condiciones de crecimiento
Acaryochloris marina NBRC 102967 (MBIC11017)	I	Medio Acaryochloris (medio 963, NITE)
Anabaena azollae AS-DS	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Anabaena cylindrica ATCC 29414	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Anabaena sp. ATCC 33047	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Anabaena sp. PCC 6411 (ATCC 27898)	IV	BG11₀ +/- fuente de N. No fija N2 en aerobiosis.
Anabaena sp. PCC 7119 (ATCC 29151)	IV	BG11₀ +/- fuente de N. (nitrato o amonio).
Anabaena sp. PCC 7120 (ATCC 27893)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato, amonio o urea).
Anabaena variabilis ATCC 29413 (PCC 7937)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Anabaena sp. Universidad de Leningrado 458 (PCC 7118)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio). No fija N2 en aerobiosis.
Anabaena sp. Universidad de Tokio M131	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio). No fija N2 en aerobiosis.
Anabaena variabilis ATCC 29413 – FD	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Anabaena variabilis ATCC 29413 – P9	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Anacystis nidulans L-1402-1	I	BG11.
Arthrospira maxima	III	BG11C.
Calothrix (Tolypothrix) sp. PCC 7601 (Fremyella diplosiphon UTEX 481)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio). Fija dinitrógeno en anaerobiosis.
Calothrix sp. PCC 9327	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Chlorogloeopsis sp. PCC 6912 (ATCC 29193)	V	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Chroococcidiopsis thermalis PCC 7203 (Myxosarcina chroococcoides)	II	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio). Fija dinitrógeno en anaerobiosis
Chroococcidiopsis sp. PCC 9317	II	BG11
Cyanothece sp. PCC 7425	I	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio). Fija dinitrógeno en anaerobiosis
Cyanothece sp. PCC 9318	I	BG11
Dermocarpa sp. PCC 7437 (Stanieria) (ATCC 29371)	II	BG11
Fischerella muscicola PCC 73103	V	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Fischerella muscicola PCC 7414	V	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Fischerella muscicola UTEX 1829	V	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Gloeobacter violaceus sp. PCC 7421	I	BG11
Gloeocapsa sp. PCC 9319	I	BG11
Geitlerinema sp. PCC 9326	III	BG11
Leptolyngbya sp. PCC 9324	III	BG11
Lyngbya sp. PCC 8106	I	BG11/ASN-III (1:1). Fija dinitrógeno en anaerobiosis.
Nodularia chucula	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio)
Nostoc ellipsosporum (Univ. de Göttingen B1453-79)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc paludosum PCC 9206	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. ATCC 29133 (PCC 73102) N. punctiforme	IV	BG11₀ + TES 10 mM pH 7,5 +/- fuente de N (nitrato o amonio)
Nostoc sp. 78-IIA-E (ATCC 43237)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. caquena	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio)
Nostoc sp. llaita	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. PCC 6705 (ATCC 29131)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. PCC 6719 (ATCC 29105)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. PCC 6720 (ATCC 27899)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. PCC 7107 (ATCC 29150)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. PCC 7413 (ATCC 29106)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. PCC 9201	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio)
Nostoc sp. PCC 9202	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostocsp. PCC 9203	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio)
Nostoc sp. PCC 9204	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio)
Nostoc sp. PCC 9329	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Nostoc sp. PCC 9331	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Oscillatoria sp. PCC 9325	III	BG11
Phormidium laminosum (Agardh) Gom. OH-1-pC11	III	BG11. Termófilo (45°C)
Phormidium persicinum 80.79	III	Medio f/2 de Guillard
Pseudanabaena sp. PCC 6903 (ATCC 27190)	III	BG11
Pseudanabaena sp. PCC 9330	III	BG11
Scytonema sp. PCC 7110 (ATCC 29171)	IV	BG11₀ +/- fuente de N (nitrato o amonio).
Spirulina sp. PCC 6313 (ATCC 29542)	III	BG11/ASNIII (1:1)
Synechococcus A6	I	BG11.
Synechococcus M4-	I	BG11.
Synechococcus sp. PCC 6301 (ATCC 27144) “S. leopoliensis”	I	BG11
Synechococcus sp. PCC 7202 (ATCC 29140)	I	BG11 + 10% ASN-III.
Synechococcus sp. PCC 7335	I	ASN-III. Fija dinitrógeno en anaerobiosis.
Synechococcus sp. PCC 7942 (Anacystis nidulans R2)	I	BG11
Synechococcus sp. PCC 9321	I	BG11
Synechocystis sp. PCC 6308 (ATCC 27150)	I	BG11
Synechocystis sp. PCC 6803 (ATCC 27184)	I	BG11
Synechocystis sp. PCC 9320	I	BG11
Synechocystis sp. PCC 9322	I	BG11
Synechocystis sp. PCC 9323	I	BG11
Thermosynechococcus elongatus BP-1	I	BG11. Termófilo (45°C)

2. ALGAS

Las algas son organismos eucariotas (con numerosas excepciones), acuáticos, (con frecuentes excepciones), autótrofos con fotosíntesis oxigénica y con un tamaño menor y una estructura menos compleja que los de las plantas terrestres. Se trata de un grupo de organismos no monofilético para el que se pueden distinguir, dependiendo de los autores, diferentes phyla o divisiones: Glaucofita, Euglenofita, Cryptofita, Haptofitas, Dinofitas, Ochrofitas, Rodofitas y Clorofitas (ver características principales en la tabla siguiente). En el Servicio de Cultivos Biológicos del Centro de Investigaciones Científicas Isla de la Cartuja se dispone de una colección de microalgas con representantes de estas Divisiones.

Condiciones de cultivo

El medio utilizado para el cultivo de las microalgas de la colección varía en función de la estirpe en cuestión. Por regla general, las microalgas se mantienen en medio solidificado con Bacto-agar (1% p/v), o bien, en medio líquido en tubos de cultivo.

Las distintas estirpes se cultivan en condiciones de fotoautotrofía en cámara termostatizada a 25°C.

Phyla o divisiones

	Pigmentos fotosintéticos	Productos de almacén	Cubierta celular
Glaucofitas	Clorofila a, ficocianina, aloficocianina, ficoeritrina, b-caroteno, xantofilas	Almidón	Algunas celulósicas
Euglenofitas	Clorofila a y b, b-caroteno, otros carotenos y xantofilas	Paramilon	Película proteínica bajo membrana plasmática
Cryptofitas	Clorofila a y c ficocianina, aloficocianina, ficoeritrina, ay b-caroteno, xantofilas	Almidón	Película proteínica bajo la membrana plasmática
Haptofitas	Clorofila a y c, b-caroteno, xantofilas	Crisolaminarina	Escamas de CaCO₃
Dinofitas	Clorofila a y c, b-caroteno, xantofilas	Almidón	Placas celulósicas bajo la membrana plasmática
Ochrofitas (diatomeas, crisófitas, algas marrones…) (eustigmatofitas)	Clorofila a y c, b-caroteno, xantofilas Clorofila a, b-caroteno, xantofilas	Crisolaminarina, lípidos Crisolaminarina	Algunas desnudas, otras con escamas orgánicas/silíceas, otras con celulosa o alginato Presente, pero de composición desconocida
Rodofitas	Clorofila a ficocianina, aloficocianina, ficoeritrina, ay b-caroteno, xantofilas	Almidón florideano	Celulosa, polisacáridos sulfatados; algunos calcificados
Clorofitas	Clorofila a y b, b-caroteno, otros carotenos y xantofilas	Almidón	Pared de celulosa u otros polímeros; escamas sobre algunos; otros desnudos; otros calcificados

(Algae, 2000, Graham LE and Wilcox LW eds., Prentice Hall Inc, USA)

Listado de estirpes (fotos de la colección-pdf)

NOMBRE	Tipo	Condiciones de crecimiento
Astasia longa 1204-17a	Euglenofita	Medio Euglena
Chlamydomonas augustae (C. nivalis o Chloromonas reticulata) CCAP11/51, SAG 26.86	Clorofita	SUEOKA. Nit+
Chlamydomonas euryale 25-89	Clorofita	SUEOKA. Nit –
Chlamydomonas reinhardtii 21gr (+)	Clorofita	SUEOKA. Nit+
Chlamydomonas reinhardtii 137c (+)	Clorofita	SUEOKA. Nit –
Chlamydomonas reinhardtii CC124 (-)	Clorofita	SUEOKA. Nit –
Chlamydomonas reinhardtii CC621 (-)	Clorofita	SUEOKA. Nit –
Chlamydomonas reinhardtii CF10 (-)	Clorofita	SUEOKA. Nit+
Chlamydomonas reinhardtii CF11 (-)	Clorofita	SUEOKA. Nit –
Chlamydomonas reinhardtii CF14 (+)	Clorofita	SUEOKA. Nit+
Chlamydomonas reinhardtii CW15-325 (+)	Clorofita	SUEOKA. Nit + Arg –
Chlamydomonas reinhardtii CW15 (-)	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Chlamydomonas reinhardtii 704 (+)	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Chlorella sp. CCAP 211/84	Clorofita	Medio H. Nit +
Chlorella fusca (C. emersonii) 211-8b	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Chlorella salina 8-86	Clorofita	Medio f/2 de Guillard
Chlorella sorokiniana 211-32	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Chlorella stigmatofora 9.86	Clorofita	Medio ASW
Chlorella vulgaris 9-88 (UAM 101)	Clorofita	SUEOKA. Nit +/-
Chlorella zofingiensis 211/14	Clorofita	SUEOKA. Nit +/-
Chlorococcum citriforme 62.80	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Chromera velia CCAP 1602/1	Apicomplexa	Medio ASW
Coelastrum proboscideum (var. dilatatum) 217-2	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Coelastrum proboscideum (var. gracile) 217-3	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Cryptomonas sp. 06/0101	Criptofita	Medio ASW
Cyanidium caldarium 16-91	Rodofita	Medio Cyanidium
Cyanophora paradoxa	Glaucofita	BG11 (2 mM NaNO₃)
Dunaliella salina	Clorofita	Medio Dunaliella
Euglena gracilis SAG 5-9	Euglenofita	Medio H
Euglena gracilis SAG 5-15	Euglenofita	Medio H
Euglena gracilis SAG 5-25	Euglenofita	Medio H
Galdieria sulphuraria 74W	Rodofita	Medio Cyanidium
Haematococcus lacustris 192.80	Clorofita	Medio H
Haematococcus lacustris ATCC 30453	Clorofita	Medio H
Haematococcus pluvialis CCAP 34/8	Clorofita	Medio H
Haematococcus pluvialis SAG 192.80	Clorofita	Medio H
Haematococcus pluvialis SAG 34-1b	Clorofita	Medio H
Heterocapsa sp. 09/0601	Dinofita	Medio f/2 de Guillard
Isochrysis galbana 05/0401	Ochrofita	Medio ASW
Micromonas commoda RCC 827	Prasinofícea	Medio ASW
Monoraphidium braunii 202.7d	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Monoraphidium circinale	Clorofita	Medio f/2 de Guillard (0,25x)
Muriellopsis sp. IBVF-L4	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Nannochloropsis gaditana	Ochrofita	Medio ASW
Nannochloris atomus SAG 14.87	Clorofita	Medio ASW

Nannochloropsis oculata 38.85	Ochrofita	Medio ASW
Nannochloropsis salina 40.85	Ochrofita	Medio ASW
Navicula pelliculosa 1050-3	Ochrofita	Específico
Neochloris oleoabundans UTEX 1185	Clorofita	BG11
Neospongiococcum (Chlorococcum) gelatinosum 64.80	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Nephroselmis olivacea CCAP 1960/4B	Prasinofícea	3N-BBM+V (CCAP)
Ochromonas danica 933-7	Ochrofita	Medio Euglena
Ostreococcus tauri RCC745	Clorofita	Medio ASW
Phaeodactylum tricornutum 07/0502	Ochrofita	Medio ASW
Phaeodactylum tricornutum CCAP 1055/1	Ochrofita	Medio ASW
Porphyridium purpureum 1380-1a	Rodofita	Medio ASW
Poterioochromonas malhamensis CCAP 933/1C	Ochrofita	Medio Euglena
Pycnococcussp. RCC245	Prasinofícea	Medio ASW
Pycnococcus provasolii CCAP 190/1	Prasinofícea	Medio ASW
Rhodomonas baltica 06/0301	Criptofita	Medio ASW
Rhodomonas salina	Criptofita	Medio ASW
Scenedesmus vacuolatus SAG 211-15	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Spirogyra sp SAG 170.80	Zygnematofícea	BG11
Tetracystis sp.	Clorofita	SUEOKA. Nit +
Tetraselmis chuii 8-6	Prasinofícea	Medio f/2 de Guillard.
Tetraselmis chui RCC128	Prasinofícea	Medio ASW
Tetraselmis suecica 03/0203	Clorofita	Medio ASW

3. ESCHERICHIA COLI

Escherichia coli es una enterobacteria muy utilizada en trabajos de biología molecular. Es una bacteria de rápido crecimiento de la que se conoce la secuencia de su genoma y que permite la introducción de ADN exógeno, ya sea por transformación, transducción o electroporación. El Servicio de Cultivos Biológicos cuenta con una colección de cepas de Escherichia coli que es utilizada por los miembros del IBVF en trabajos de ADN recombinante.

Listado de cepas

CEPA	Genotipo
E. coliBL21 (DE3)	F^– ompT (lon) hsdS(r_B-m_B-, una E. coli B) con DE3.
E. coliBL21 (DE3) lacI^q	F´::Tn10 proA+B+ lacIq D(lacZ)M15/ ompT (lon) hsdS (r_B-m_B-, una E. coli B) con DE3.
E. coli BL21 (DE3) pLysS	F^– ompT hsdS_B (r_B^–m_B^–) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)
E. coliBL21 (DE3)(pIZ227)	pIZ227 porta, junto con lacIq, un gen de una lisozima específica de la polimerasa T7. Cm^r.
E. coliBL21 CodonPlus(DE3)-RIL	E. coliB F^– ompT (lon) hsdS(r_B-m_B-) dcm⁺ Tet^r gallHte (argU ileY LeuW Cm^r) -argU, AGA/AGG; IleY, AUA; LeuW, CUA-
E. coli BL21 Rosetta(DE3)pLys	F^–ompThsdS_B(r_B^–m_B^–) gal dcm (DE3)pLysRARE (Cm^R) (tRNAs para AGG, AGA, AUA, CUA, CCC y GGA en pLys)
E. coli BL21-AI	F^– ompT hsdS_B (r_B^–m_B^–)gal dcm araB::T7RNAP-tetA lon (tet^R)
E. coli BL21-T1^R	F^– ompT hsdS_B(r_B^–m_B^–) gal dcm tonA
E. coli C41(DE3)	F^– ompT hsdS_B (r_B– m_B-)gal dcm (DE3)
E. coli C43(DE3)	F^– ompT hsdS_B (r_B– m_B-)gal dcm (DE3)
E. coli CC118 lambda pir	Delta(ara-leu) araD delta lacX74 galE galK phoA20 thi rpsE rpoB argE(am)recA (lambda pir)
E. coli DB3.1	F– gyrA462 endA1 (sr1-recA) mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(SmR) xyl-5 – leu mtl1 ‘gateway’
E. coli DH10B T1R	F^– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara leu) 7697 galU galK rpsL nupG λ– tonA
E. coliDH5a	F^–supE44 hsdR17 (r_K-r_K+) recA1 girA96 (Nal^r) endA1 thi-1 relA1 D(lacZYA-argF) (Ø80lacZDM15) U169
E. coli GM119	F^– dam-3 dcm-6 metB1 galK2 galT22 lacY1 tsx78 supE44 (thi1 tomA31 mtl1)
E. coliHB101	F^–hsdS20(r_B-m_B-) leu supE44 ara14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 xyl-5 mtl-1 recA13 mcrB
E. coliJM109	F´ traD36 lacIq D(lacZ)M15 proA+B+/e14-(McrA-) D(lac-proAB) thi gyrA96(Nal^r) endA1 hsdR17 (r_K-m_K+) relA1 supE44 recA1
E. coliJM109(DE3)	endA1, recA1, gyrA96, hsdR17(rk-, mk+), relA1, supE44, lambda -, Delta(lac-proAB), [F’, traD36, proAB, lacIqZdeltaM15]/ DE3
E. coli K12	Silvestre
E. coli Lemo21(DE3)	fhuA2 [lon] ompT gal (DE3)[dcm] DhsdS/pLemo (Cm^R)
E. coli S17-1 Lambda pir	RecA thi pro hsdR-M+ RP4:2-Tc:Mu:Km::Tn7 (Tpr Smr) (lambda pir)
E. coli SG13009 (pREP4)	F^–thi lac mtl; pREP4(Km^R, lacI^q)
E. coliXL1-Blue	F´::Tn10 proA+B+ lacIq D(lacZ)M15/recA1 endA1 gyrA96(Nal^r) thi hsdR17 (r_K-m_K+) supE44 relA1 lac
E.coli Solu (BL21)	F^– ompT hsdSB (r_B-m_B-) gal dcm (DE3)
E. coli XL1-Blue MRA (P2)	D(mcrA)183 D(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA 1supE44 thi-1 gyrA96 relA1 lac (P2 lysogen)
E.coliMC1061	F^– araD139 D(ara-leu)7696 galE15 galK16 D(lac)X74 rpsL(Str^r) hsdR2 (r_K– m_K+) mcrA mcrB1

Medios de cultivo Medio BG11₀(Rippka et al, 1979)

Na₂CO₃	0,2 mM	H₃BO₃	46 µM
MgSO₄	0,3 mM	MnCl₂	9,1 µM
CaCl₂	0,24 mM	Na₂MoO₄	1,6 µM
K₂HPO₄	0,2 mM	ZnSO₄	0,8 µM
ácido cítrico	28,5 µM	CuSO₄	0,3 µM
citrato férrico-amónico (17% Fe)	6 mgl^-1	CoCl₂	0,2 µM
Na₂-EDTA	2,4 µM

El medio se prepara a partir de un concentrado 100x que carece del K₂HPO₄ y de la fuente de nitrógeno, los cuales se añaden antes de esterilizar en el autoclave.

Para medio sólido se utiliza Bacto-Agar a concentración final 1% p/v. Éste se autoclava, en la mitad de volumen final, por separado de los nutrientes y se mezcla con los mismos antes de verterlo en las cajas Petri.

Medio BG11

Medio BG11₀ suplementado con NaNO₃ a una concentración final de 17,6 mM.

Medio BG11C Medio BG11₀ suplementado con NaNO₃ a una concentración final de 17,6 mM y NaHCO₃ a una concentración final de 10 mM.

Medio ASN-III (Rippka et al, 1979)

NaCl 25 g/l	citrato férrico-amónico (17% Fe) 0,003 g/l
MgSO₄ 3,5 g/l	Na₂-EDTA 0,0005 g/l
MgCl₂.6H₂O 0,24 mM	Na₂CO₃ 0,04 g/l
KCl 0,5 g/l	Metales traza (A5+Co) 1 ml/l
K₂HPO₄ 0,02 g/l
NaNO₃ 0,75 g/l
CaCl₂.2H₂O 0,5 g/l
ácido cítrico 0,003 g/l

Metales traza (A5 + Co)

H₃BO₃ 3,09 g/l

MnSO₄.4H₂O 2,9 g/l

ZnSO₄.7H₂O 0,29 g/l

(NH₄)₆Mo₇O₂₄^.4H₂O 0,62 g/l

CuSO₄^.5H₂O 124 mg/l

CoCl₂^.6H₂O 240 mg/l

Medio Sueoka

KH₂PO₄ 8,3 mM

K₂HPO₄ 5,3 mM

MgSO₄^.7H₂O 0,25 mM

CaCl₂^.2H₂O 0,133 mM

TRAZAS HUTNER 1x

NH₄Cl 9,35 mM o NaNO₃ 17,6 mM

Trazas Hutner 200x:

Se disuelven 12,7 g de EDTA-Na^.2H₂O en 250 ml de agua.
Se disuelven 1 a 1 por este orden, calentando previamente a 100ºC, en 500 ml de agua:

– H₃BO₃ 2,28 g

– ZnSO₄^.7H₂O 4,40 g

– MnCl₂^.4H₂O 1,02 g

– FeSO₄^.7H₂O 1,00 g

– CoCl₂^.6H₂O 0,32 g

– CuSO₄^.5H₂O 0,32 g

– (NH₄)₆MoO₂₄^.4H₂O 0,22 g

Se mezclan las dos soluciones anteriores.
Se lleva hasta 100ºCy se deja enfriar hasta 80-90ºC.
Se ajusta el pH a 6,8 con KOH 20% (Tª siempre >70ºC)
Se lleva el volumen hasta 1 litro con agua destilada y se guarda en oscuridad durante 2 días, tras lo cual se puede utilizar.

Medio H

Medio Sueoka suplementado con 1,5 g/l de proteosa peptona.

Medio Cyanidium

K₂HPO₄	0,3 g
CaCl₂	0,02 g
MgSO₄^.7H₂O	0,3 g
KNO₃	3,0 g
FeSO₄^.7H₂O	0,003 g
H₂SO₄	1,8 g
Metales traza (A5+Co)	1 ml/l
Agua (hasta 1 litro)

Metales traza (A5 + Co)

H₃BO₃ 3,09 g/l

MnSO₄.4H₂O 2,9 g/l

ZnSO₄.7H₂O 0,29 g/l

(NH₄)₆Mo₇O₂₄^.4H₂O 0,62 g/l

CuSO₄^.5H₂O 124 mg/l

CoCl₂^.6H₂O 240 mg/l

Medio Euglena

Acetato sódico 1 g

Extracto de carne 1 g

Bacto-triptona 2 g

Extracto de levadura 2 g

CaCl₂^.2H₂O 10 mg

Agua (hasta un litro)

Para medio sólido se utiliza Bacto-Agar a concentración final 1% p/v.

Medio f/2 de Guillard

Añadir a 998 ml de agua de mar natural 1 ml de los stocks 1 y 3.

Autoclavar y añadir, una vez frío, 200 µl del stock 2 (esterilizado por filtración 0,2 µm).

Stock 1. Metales traza.	Stock 2. Complejo vitamínico.	Stock 3.
EDTA-Na₂ 4,16 g	A. nicotínico 1 mg/ml	KNO₃ 15 g
FeCl₃^.6H₂O 3,15 g	A. para-aminobenzoico 1 mg/ml	NaH₂PO₄ 1,13 g
CuSO₄^.5H₂O 0,01 g	NaHCO3 0,5 mg/ml	Agua (hasta 100 ml)
ZnSO₄^.7H₂O 0,022 g	Tiamina HCl 0,5 mg/ml
CoCl₂^.6H₂O 0,01 g	Biotina 0,1 mg/ml
MnCl₂^.4H₂O 0,18 g	Vit. B12 0,035 mg/ml
Na₂MoO₄^.2H₂O 0,006g
Agua (hasta un litro)

MEDIO ASW

Preparar una mezcla de componentes secos compuesta de:

– NaCl 400 mM

-MgSO₄.7H₂O 20 mM

– CaCl₂.2H₂O 10 mM

– NaBr 1.7 mM

– KCl 10 mM

-MgCl₂ 20 mM

Esterilizar por autoclave. Añadir en esterilidad a la mezcla anterior (por litro):

– H₃BO₃ 0.2 mM 1 ml

– Trizma 5%, pH 7.8 5 ml

– Stock 1 de f/2 1 ml

– Stock 3 de f/2 2 ml

– NaSiO₃.9H₂O 100 mM 1 ml

-Stock vitaminas: 0.5 ml

– Tiamina 0.2 mg/ml

– Biotina0.3 ug/ml .

-Vit. B12 1 ug/ml

Medio Navicula

NaNO₃1,18 mM

K₂HPO₄ 77 mM

Na₂SiO₃ 0,86 mM

Triptona 1 g/l

Concentrado BG11 2x

Para medio sólido se utiliza Bacto-Agar a concentración final 1,5% p/v. Éste se autoclava, en la mitad de volumen final, por separado de los nutrientes y se mezcla con los mismos antes de verterlo en las cajas Petri.

Medio Acaryochloris

NaNO₃	200 mg
Na₂HPO₄	1,4 mg
K₂HPO₄	5 mg
NH₄Cl	2,68 mg
Fe-EDTA	5,2 mg
Mn-EDTA	0,332 mg
Na₂-EDTA	37,2 mg
ZnSO₄.7H₂O	0,023 mg
CoSO₄.7H₂O	0,014 mg
Na₂MoO₄.H₂O	0,0073 mg
CuSO₄.5H₂O	0,0025 mg
H₂SeO₃	0,0017 mg
MnCl₂.4H₂O	0,18 mg
Thiamin-HCl	0,2 mg
Biotin	0,0015 mg
VitaminB12	0,0015 mg
Agua de mar natural	hasta 1000 ml